ADPG 跟淀粉引物反应的时候,可溶性淀粉合成酶(SSS)就会把葡萄糖分子转移到引物上,并且生成 ADP。为了测这个反应,你得在体系里加上丙酮酸激酶、己糖激酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶。这三种酶会依次把 NADP+ 还原成 NADPH。因为 NADPH 的生成量和 ADP 的生成量是成正比的,所以你只要在 340nm 下测一下 NADPH 的增加量,就能算出 SSS 的活性了。这套试剂盒要配备紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机这些设备。所有液态的试剂,比如酶工作液和显色剂,都得放在 2-8℃ 的冰箱里冷藏,别挨着制冷口结冰。那些活性特别高的成分像酶制剂或者标准品母液,就最好分装后放在-20℃ 冷冻保存。要是有稀有酶或者荧光标记物这种特别娇贵的试剂,最好放到-80℃ 超低温长期储存。干粉和稀释液可以在室温下 15-25℃ 放着,别靠近热源。有一些怕光的东西像酶或者还原性底物一定要避光存起来,用棕色瓶或者避光袋包好,别被阳光直射到。 对于已经开封的试剂得赶紧密封好,防止氧化或者微生物跑进去;不同试剂盒的东西也要分开放,免得交叉污染。标准品和质控品得跟核心试剂一起存着条件一样才行。 做完实验后先计算标准品和样本复孔的平均信号值(比如 OD 值),把偏差超过 10% 的值给剔除掉。然后用平均值减掉空白对照的平均值,得到校正信号值。横坐标写标准品浓度,纵坐标写标准品的校正信号值,再去拟合一条线性回归方程 Y=aX+b。这个相关系数 R2 至少得有 0.99 才行。 这次实验一共要测 60% 的样本吧?其实正式测定之前最好先拿 3 个预期差异比较大的样本做预测定。Soluble starch synthase(EC 2.4.1.21)这种酶通常是以游离态存在于质体基质里面的,它主要负责把淀粉链给延长出来。 记得这个产品只能用于科研实验哦!