缓冲盐的使用有三个雷区

色谱柱在使用过程中,性能差异巨大。有些柱子用几天就会出现分叉、前沿、拖尾等现象,导致柱效急速下降;而有些柱子却能稳定运行一两年。这主要是因为日常操作上的差异。如果掌握正确的节奏,色谱柱就能够延长使用寿命。缓冲盐的使用有三个雷区:一是柱压飙升,二是保留时间漂移,三是柱效崩塌。这些问题的出现主要是因为缓冲盐析出堵塞微孔、进样前未彻底冲洗、盐渗入硅胶深层等原因。为了避免这些问题,在使用缓冲盐流动相之前要先用不含缓冲盐的流动相冲洗一段时间,直到基线平稳。流动相中的水相比例要保持在分析时的比例之上。使用完后也需要用相同比例的流动相冲洗30分钟直到基线平稳。长期停用则需要再加冲纯有机相保护层。同时要注意避免盐酸盐腐蚀钢接头,现配现用防止细菌滋生引起异常峰出现。95:5水甲醇过渡可以避免纯有机溶剂导致盐析出。pH值要控制在合理范围内防止结晶产生。30℃加热可以促进溶解。白色结晶可用10%硝酸拆洗液路疏通恢复正常。另外要选择优质试剂防止杂质盐影响性能。当柱压突升时,可以尝试反接高水相流动相利用压力差冲出堵塞物;如果无效则可以拆筛板进行超声清洗甚至更换受污染填料再填补新填料。为了让柱子老而弥坚,日常习惯要建档留痕记录新柱性能测试结果和后续变化;样品预处理要流动相溶解、预柱去杂质、0.45μm过滤;流动相需要满足溶解力、惰性、低黏度、适配检测器等指标;流速要根据不同规格柱选择最佳流速;有机相选择方面反相柱推荐甲醇(乙腈除外),正相柱用30-60℃石油醚或提纯己烷;水要使用≥18MΩ超纯水进行冲柱防菌。当柱头塌陷导致填料下沉形成空腔时,可以卸下螺丝填入同粒度填料反复压实再平衡即可恢复分离效果。 总结一下缓冲盐口诀:用前要过滤,用后需冲洗——把这句话贴在操作台上能让色谱柱多活一年。