外泌体这东西，大家都知道，它是直径30到150纳米的囊泡，在细胞间传递信息很重要。想要真正搞清楚它，还得靠电镜、NTA还有WB这三个手段一起上。茁彩生物这次就来给大家讲讲为啥非要这三重验证不可。其实就是为了避坑，因为单靠哪一个都不行。电镜只能看形状，却没法数清楚数量；NTA能算出有多少个颗粒，但没法确定它到底是不是外泌体；WB虽然能检测标志物，但看不出来形状。所以这三者必须凑齐，才能把形态、大小、身份都给验出来，这样才能算是把外泌体研究得透透的。 首先说说电镜检测，它算是形态学上的金标准了。最常见的就是透射电镜TEM和扫描电镜SEM。这东西的作用就是让你直接看到外泌体的超微结构，看看它有没有典型的“杯托状”或者“双凹圆盘状”，顺便还能检查一下囊泡有没有破裂或者聚集的情况。不过做这个实验的时候要注意样品的制备，得先给它染色处理一下，温度也得控制好别太高，不然容易把囊泡弄破。 接下来是NTA检测，这个主要是用来量化外泌体的。它利用的是纳米颗粒的布朗运动原理，能把粒径分布和浓度都给测出来。这个过程很快，一般一个样品10到20分钟就能搞定。它还有个好处就是无损检测，不会把外泌体的结构给弄坏。做实验的时候记得要把血清或者血浆先离心处理一下去掉杂质，稀释的时候比例也得调准点。 最后是WB实验，这就是验证身份的关键依据了。通过检测CD63、CD81、CD9这些公认的标志物还有TSG101和Alix这两个蛋白印迹实验中的Alix和TSG101，就能从分子层面确认是不是外泌体。做这个实验的时候得小心点提取蛋白质的时候要加蛋白酶抑制剂防止蛋白降解。孵育抗体的时间温度也要把握好别让背景太高。 总结一下就是：先用电镜看清楚形态怎么样（TEM/SEM），然后用NTA去定它的粒径和浓度（NTA），最后用WB来验一下身份到底是啥（WB）。这三个环节环环相扣形成了一个完整的验证体系。这也是国际上公认的标准做法了。只要把这三个步骤都做好了，不管是发论文还是做临床检测都没问题。