想要真正搞懂腺病毒载体？看完这篇就够了。首先，这种叫做Adenovirus的病毒，是个不带包膜的DNA病毒，特点就是它的复制完全不靠宿主细胞分裂。目前市面上的腺病毒载体大多是基于血清型2和5的，通过转基因技术把E1和E3基因给换掉了。这么做不仅降低了病毒的复制能力，还让这些重组腺病毒只能在高水平表达E1基因的细胞中干活。HEK293细胞系就很适合用来生产这种载体，因为它能提供E1蛋白。 腺病毒本身长得像个直径70到100纳米的小颗粒，外壳是二十面体结构，由240个六邻体和12个五邻体组成。五邻体蛋白底部还长着12根纤毛，顶端形成的头节区负责跟细胞表面的受体结合。基因组方面，哺乳动物腺病毒的DNA大概有36千碱基对那么长。两头各有一段约100个碱基的反向末端重复序列（ITR），跟末端蛋白（TP）连在一起，这对复制和早期基因的转录至关重要。ITR内侧还有包装信号Ψ，帮助基因组进入衣壳。 基因组里有早期表达的E1到E4基因负责复制，晚期的L1到L5基因负责组装颗粒。根据缺失基因的不同，腺病毒载体分成了三代。第一代缺少E1或者E1和E3，虽然没法复制但增加了容量。第二代除了第一代缺的基因还拿掉了E2/E4。第三代是个辅助质粒依赖型，免疫原性大大降低。这种载体结合了HEK细胞系和Ad5基因组结构。 说回优势，腺病毒能感染的宿主范围广，连不分裂的细胞也能拿下。在条件好的情况下感染率能达到100%。纯化后的病毒滴度能高达10的12次方到13次方每毫升。它还特别好扩增，直接就能二次扩增。因为不整合进染色体，安全性很高。理化性质也挺稳定。 不过它也有缺点：表达时间短。因为不在基因组里扎根，细胞分裂后就丢失了。还有免疫原性高的问题，在某些敏感动物模型里容易引起炎症反应。 总之，Ad5腺病毒载体通过缺失E1和E3基因实现了大容量的外源基因插入（高达7.5千碱基对）。这种工具既容易操作功能又强大，科研人员现在用得特别多。